固相萃取儀的萃取效率受哪些因素的影響

然而影響萃取效率的因素有以下幾種：

（1）填料（固定相）-核心

選擇合適的SPE柱填料是保證理想結(jié)果的前提。

（2）洗脫溶劑的強(qiáng)度

1.采用正相固定相，溶劑強(qiáng)度隨其極性增強(qiáng)而增強(qiáng)

2.采用反向固定相，溶劑強(qiáng)度隨其機(jī)性減弱而增強(qiáng)（3）PH值

離子交換固定相、被分析物和干擾物質(zhì)的PKa各不相同。通過(guò)調(diào)節(jié)PH大小，可以使固定相帶電荷，被分析物帶相反電荷，而使干擾物質(zhì)不帶電荷；或者反過(guò)來(lái)，使固定相帶電荷，干擾物帶相反電荷，而使被分析物不帶電荷，從而達(dá)到分離純化的目的。

目前，氮吹儀也叫氮?dú)獯蹈蓛x，自動(dòng)快速濃縮儀等，在市場(chǎng)上普遍有兩種：干式氮吹儀和水浴式氮吹儀。氮吹儀代替?zhèn)鹘y(tǒng)的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)樣品進(jìn)行濃縮已經(jīng)被越來(lái)越多的人認(rèn)可并接受。

1. 氮吹儀的工作原理

我們知道，加快蒸發(fā)有兩個(gè)方法：加強(qiáng)它周圍的空氣流動(dòng)和它的溫度。氮?dú)馐且环N不活潑的氣體，能起到隔絕氧氣的作用，防止氧化。氮吹儀利用氮?dú)獾目焖倭鲃?dòng)打破液體上空的氣液平衡，從而使液體揮發(fā)速度加快；并通過(guò)干式加熱或水浴加熱方式升高溫度（目標(biāo)物的沸點(diǎn)一般比溶劑的要高一些），從而達(dá)到了濃縮的目的。

2. 氮吹儀的主要部件

主要包括氣體分配室、氣針、高度調(diào)節(jié)支架、氮?dú)饨涌凇⒏叨任⒄{(diào)部件、支柱、固定組件、機(jī)箱、襯套、加熱塊、樣品試管或試瓶等部件。

3. 氮吹儀的使用方法（以水浴式氮吹儀為例）

氮吹儀安裝好后，底盤支撐在恒溫水浴內(nèi)，打開水浴電源，設(shè)定水浴溫度，水浴開始加熱。提升氮吹儀，將需要蒸發(fā)濃縮的樣品分別安放在樣品定位架上，并由托盤托起，其中托盤和定位架高低可根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品試管的大小調(diào)整。打開流量計(jì)針閥，氮?dú)饨?jīng)流量計(jì)和輸氣管到達(dá)配氣盤，配氣后送往各樣品位上方的針閥管（安裝在配氣盤上）。然后，通過(guò)調(diào)節(jié)針閥管針閥，氮?dú)饨?jīng)針閥管和針頭吹向液體樣品試管，可通過(guò)調(diào)整鎖緊螺母可以上下滑動(dòng)針閥管，調(diào)整針頭高度，以樣品表面吹起波紋，樣品又不濺起為好。最后，將氮吹儀放于水浴中，直到蒸發(fā)濃縮完成。

4. 氮吹儀的優(yōu)點(diǎn)

（1）一次可處理多個(gè)樣品，在多因素、多水平的重復(fù)實(shí)驗(yàn)中優(yōu)勢(shì)更為明顯。

（2）實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)潔、靈活。可以不受約束地隨時(shí)調(diào)節(jié)濃縮的進(jìn)程。

（3）實(shí)驗(yàn)中不需要操作者長(zhǎng)時(shí)間的維護(hù)，節(jié)省人力。

（4）氮吹儀在濃縮時(shí)準(zhǔn)確、靈敏可避免樣品損失。

5. 氮吹儀的應(yīng)用領(lǐng)域

氮吹儀主要用于色譜、質(zhì)譜等分析樣品的純化和制備，廣泛應(yīng)用于水、甲苯、甲醇、丙酮等溶劑的揮發(fā)。應(yīng)用領(lǐng)域有：

（1）農(nóng)殘分析：如蔬菜、水果、谷物、植物組織

（2）環(huán)境分析：如飲用水、地下水和污染水水樣

（3）制藥藥檢：如中藥制藥

（4）生物分析：如血清、血漿、血液、尿液

（5）商品檢驗(yàn)：如二f英、克羅特羅等的檢驗(yàn)（6）食品飲料：如牛奶、酒、啤酒、液體飲料

高效液相色譜儀的使用和原理分析

高效液相色譜儀(HPLC)是分析實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)試儀器之一，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。此種儀器在使用過(guò)程中，難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題，并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預(yù)防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器并最大限度地發(fā)揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個(gè)方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個(gè)問(wèn)題。

一、使用試管的問(wèn)題

1、試管的潔凈問(wèn)題。

高效液相色譜分析法是一個(gè)很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。例如，在用甲醇作溶劑來(lái)溶解樣品時(shí)，所用的小試管是用橡膠塞來(lái)做蓋子的，因此，在每次進(jìn)樣時(shí)，都有一個(gè)保留時(shí)間固定的干擾峰存在，后經(jīng)證實(shí)，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產(chǎn)生，換用玻璃試管后，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問(wèn)題。

近年來(lái)，一次性塑料試管給試驗(yàn)人員帶來(lái)了極大的方便，但是，在使用過(guò)程中一定要注意有機(jī)溶劑對(duì)試管的溶解現(xiàn)象，在利用此種試管提取樣品時(shí)，有些有機(jī)溶劑(如氯仿等)對(duì)管壁有溶解現(xiàn)象，這些被溶解下來(lái)的物質(zhì)有時(shí)也能在檢測(cè)器上產(chǎn)生信號(hào)，從而干擾樣品的測(cè)定。這時(shí)，可用相同的實(shí)驗(yàn)條件先行試驗(yàn)一下，看看不含被抽提物時(shí)，提取液在檢測(cè)器上能否產(chǎn)生干擾信號(hào)，如確有干擾信號(hào)存在，就只能換用耐有機(jī)溶劑的玻璃試管了。

3、被測(cè)樣品在試管壁上的吸附問(wèn)題。

這個(gè)問(wèn)題也應(yīng)引起注意，否則也會(huì)影響測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性，在治療藥物監(jiān)測(cè)(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測(cè)藥物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，為防止提取中吸附現(xiàn)象的發(fā)生，可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進(jìn)樣閥的問(wèn)題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進(jìn)樣閥是7725型進(jìn)樣閥，其內(nèi)部的六通閥結(jié)構(gòu)使進(jìn)樣操作非常方便，但是，如果使用不當(dāng)，也會(huì)帶來(lái)問(wèn)題。例如，在高效液相色譜法的試驗(yàn)過(guò)程中，有時(shí)會(huì)有異常色譜峰的出現(xiàn)以及重現(xiàn)性不好的問(wèn)題，這主要是由于操作方法不當(dāng)所引起，要想解決此類問(wèn)題，需從以下幾個(gè)方面入手。

1、進(jìn)樣量的控制。

用進(jìn)樣閥來(lái)進(jìn)樣時(shí)，閥內(nèi)的樣品環(huán)是定量的，(一般分析型進(jìn)樣閥的樣品環(huán)體積為20ul)，由于進(jìn)樣時(shí)，注射到進(jìn)樣閥內(nèi)的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液，從而使用進(jìn)樣閥來(lái)準(zhǔn)確地定量，則必須使進(jìn)樣量大于樣品環(huán)體積的2倍。如果用注射器來(lái)控制進(jìn)樣量，則最大只能注射樣品環(huán)體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導(dǎo)致定量分析的誤差。

2、進(jìn)樣閥的清潔問(wèn)題。

如果樣品環(huán)中有上次進(jìn)樣時(shí)樣品的殘留，必然會(huì)污染下次注射進(jìn)的樣品，為防止這種現(xiàn)象的發(fā)生，應(yīng)按下列步驟操作：a.進(jìn)樣閥有2個(gè)位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時(shí)，以注射器將流動(dòng)相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置時(shí)，再以流動(dòng)相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最后，再將樣品注射到進(jìn)樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進(jìn)樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3、進(jìn)樣閥溢流管的堵塞。

有時(shí)，進(jìn)樣閥的溢流管會(huì)發(fā)生堵塞現(xiàn)象，向進(jìn)樣閥內(nèi)注射樣品時(shí)，注射針推不動(dòng)。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動(dòng)相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空端口處結(jié)晶所致。此時(shí)，可用小燒杯盛少量蒸餾水對(duì)溢流管口稍加浸泡，端口處鹽的結(jié)晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進(jìn)樣完成之后，用蒸餾水反復(fù)沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發(fā)生。

三、流動(dòng)相(MOBLLE PHASE)的問(wèn)題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來(lái)配制流動(dòng)相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級(jí)的專用試劑，如色譜純?cè)噭Ｔ谝蟛惶珖?yán)格時(shí)，優(yōu)級(jí)純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測(cè)器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來(lái)考慮，應(yīng)該使用紫外吸收小且雜質(zhì)含量少的色譜純?cè)噭?/p>

1、流動(dòng)相的過(guò)濾。

配制好的流動(dòng)相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來(lái)過(guò)濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會(huì)堵塞泵口、柱頭上的過(guò)濾器，這樣就堵塞了流動(dòng)相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時(shí)，要換用經(jīng)過(guò)濾的流動(dòng)相，并將堵塞的濾器拆下來(lái)浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動(dòng)相的脫氣。

流動(dòng)相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動(dòng)相中的氣體，否則，這些氣體會(huì)使柱填料的性能降低，還能夠?qū)z測(cè)器的信號(hào)產(chǎn)生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮?dú)饷摎獾取Ｕ婵彰摎夥ê偷獨(dú)饬髅摎夥ㄊ悄壳白畛Ｓ玫拿摎夥āＫ图状蓟旌虾髸?huì)產(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會(huì)進(jìn)入色譜柱和檢測(cè)器，并將影響分析工作的正常進(jìn)行。?

四、色譜柱的使用和保養(yǎng)

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng)，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。

1、使用預(yù)柱和保護(hù)柱。

預(yù)柱(pre-column)安裝于泵和進(jìn)樣器之間，它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了完全的平衡，并防止了對(duì)柱填料有破壞作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱，保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同。預(yù)柱和保護(hù)柱可以經(jīng)常更換，而不需要經(jīng)常更換色譜柱，這就延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命。

2、防止氣體進(jìn)入色譜柱。

有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進(jìn)入的，否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此，為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱，一定要使用經(jīng)過(guò)脫氣的流動(dòng)相，并且要嚴(yán)格按照下列步驟來(lái)安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進(jìn)入；c.如無(wú)溶劑滲出時(shí)，表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了，此時(shí)，可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上，以流動(dòng)相來(lái)反方向沖洗色譜柱，以便將柱內(nèi)的空氣排除。最好以0.2ml/min的小流量來(lái)沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會(huì)導(dǎo)致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說(shuō)明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了。

3、色譜柱的清洗。

為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。首先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來(lái)洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì)，此時(shí)應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來(lái)，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動(dòng)相是緩沖溶液，則應(yīng)先用蒸餾水來(lái)沖洗色譜柱，以沖掉柱內(nèi)的鹽，然后再用合適的溶劑來(lái)沖洗。

凝膠濾過(guò)色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動(dòng)相，用完之后當(dāng)然要用蒸餾水來(lái)沖洗。如果是連續(xù)操作，可以將緩沖溶液置于柱內(nèi)過(guò)夜，但最好是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動(dòng)相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對(duì)柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。

如果色譜柱暫時(shí)不用，存放時(shí)要注意以下幾點(diǎn)：

a.幾天之內(nèi)的短期放置，應(yīng)先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來(lái)沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.如果色譜柱長(zhǎng)期不用，僅用上述方法來(lái)處理就不行了，這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說(shuō)明書中所指明的溶劑來(lái)充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內(nèi)如果有微生物的生長(zhǎng)則會(huì)使柱效降低，此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來(lái)沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長(zhǎng)期放置時(shí)，一定要將色譜柱的兩端封嚴(yán)，以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象，因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。

c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下，如果放置于0℃以下的環(huán)境里，柱內(nèi)就會(huì)結(jié)冰，這也將導(dǎo)致柱效的降低。

高效液相色譜儀的構(gòu)造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、記檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統(tǒng)。為了取得較好的分析結(jié)果，HPLC?儀器對(duì)于準(zhǔn)確度、精確度、靈敏度及結(jié)果重現(xiàn)性有較高的要求。

高效液相色譜儀的工作原理

儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。

擴(kuò)展資料：

高效液相色譜儀的構(gòu)造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、記檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統(tǒng)。為了取得較好的分析結(jié)果，HPLC?儀器對(duì)于準(zhǔn)確度、精確度、靈敏度及結(jié)果重現(xiàn)性有較高的要求。

A

BOUT

高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)包括：溶劑儲(chǔ)液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置。其中，高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一，輸送壓力達(dá)150―350×105Pa。輸液系統(tǒng)要為HPLC儀器提供流量恒定、準(zhǔn)確、無(wú)脈沖的流動(dòng)相，流量的精度和長(zhǎng)期的重復(fù)性要好，同時(shí)還要提供精度好、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好的多元溶劑梯度。因此，輸液泵的好壞直接影響著整個(gè)系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性。

進(jìn)樣系統(tǒng)：進(jìn)樣能在試樣引入色譜柱，有六個(gè)接口：1,4之間接定量環(huán)；2接高壓泵；3接色譜柱；5,6接廢液管。

色譜分離系統(tǒng)：色譜柱通常為不銹鋼柱，內(nèi)裝各種填充劑。常用的填料為硅膠，可用于正相色譜;化學(xué)鍵合固定相，根據(jù)鍵合的基團(tuán)不同，可用于反相或正相色譜。其中、最常用的是十八烷基鍵合硅膠，即ODS柱，可用于反相色譜或離子對(duì)色譜。

檢測(cè)系統(tǒng)：檢測(cè)系統(tǒng)用于連續(xù)檢測(cè)色譜柱流出的物質(zhì)，進(jìn)行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩(wěn)定、響應(yīng)值的線性范圍寬等。近年來(lái)各國(guó)都在研究開發(fā)新的檢測(cè)技術(shù)，進(jìn)一步擴(kuò)大了HPLC的應(yīng)用。

根據(jù)檢測(cè)需要的不同檢測(cè)器可分為紫外檢測(cè)器(UVD)、示差折光檢測(cè)器(RID)、電化學(xué)檢測(cè)器(ECD)、紅外檢測(cè)器(IRD)、核磁共振檢測(cè)器(NMRD)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MSD)、蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)、小角度激光散射檢測(cè)器(LALLSPD)。

數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：高效液相色譜的分析結(jié)果除可用記錄儀繪制譜圖外，還可使用微處理機(jī)和色譜數(shù)據(jù)工作站來(lái)記錄和處理色譜分析的數(shù)據(jù)。

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理：

儲(chǔ)備器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）中；由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附―解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分配成單個(gè)祖墳依次從柱內(nèi)流出，經(jīng)過(guò)哦檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。

在適宜的條件下，高效液相色譜可分離溶液中不同的組分，樣品進(jìn)高效液相色譜儀，經(jīng)反相C18液相色譜分離后，以色譜峰的保留時(shí)間定性，利用色譜峰面積在一定范圍內(nèi)與濃度成線性關(guān)系進(jìn)行定量。本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法，用β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品分析未知濃度的類胡蘿卜素產(chǎn)物的相關(guān)含量。

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、 樣品和標(biāo)準(zhǔn)品溶解和過(guò)濾：用丙酮作溶劑，溶解β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品和類胡蘿卜素樣品。用濾膜（0.45um）過(guò)濾，備用。

2、 開機(jī)，依次通過(guò)各分離單元、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)電源。

3、 流動(dòng)相脫氣，確認(rèn)所有溶劑管路都充滿溶劑。

4、 啟動(dòng)溶劑管理系統(tǒng)，沖洗自動(dòng)進(jìn)樣器和進(jìn)樣針，裝入樣品和轉(zhuǎn)盤，編輯分析方法及執(zhí)行樣品分析表。

5、 樣品測(cè)定：色譜條件，色譜柱（C18，4.6mm*250mm，5um）；流動(dòng)相，甲酸；乙腈；異丙醇=5：4：1（v/v）；流速 1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)，480nm。

單位內(nèi)標(biāo)法定量：取混合使用液20ul注入高效液相色譜儀進(jìn)行分離。記錄各個(gè)峰的峰面積。按下式計(jì)算相對(duì)含量。

q樣品=（q標(biāo)準(zhǔn)品*A樣品）/A標(biāo)準(zhǔn)品

6、 關(guān)機(jī)，使用完畢后，按規(guī)定用適當(dāng)?shù)娜軇_洗色譜柱、系統(tǒng)管路、自動(dòng)進(jìn)樣器、進(jìn)樣針和柱塞桿密封墊，關(guān)閉電源開關(guān)。數(shù)據(jù)采集完畢后，關(guān)閉紫外檢測(cè)器電源開關(guān)。處理數(shù)據(jù)后，關(guān)閉計(jì)算機(jī)電源開關(guān)，并做使用登記。

自20世紀(jì)70年代以來(lái)，中國(guó)已有多個(gè)研究部門和工廠開發(fā)和生產(chǎn)高液相色譜儀。 LC已進(jìn)入中國(guó)許多科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)用階段，特別是對(duì)熱穩(wěn)定性差或蒸氣壓低的樣品組分進(jìn)行分析，顯示出LC的優(yōu)越性。

近年來(lái)，高液相色譜儀在油脂分析方面取得了突破，特別是在石油中測(cè)定多環(huán)芳烴、重?zé)N中。以己烷、二氯甲烷為流動(dòng)相，茍愛(ài)仙采用多維高效液相色譜技術(shù)和適當(dāng)?shù)奶荻认疵摋l件，實(shí)現(xiàn)了殘留烴基的良好分離和檢測(cè)。呂振波等還使用HPLC分離和分析潤(rùn)滑基礎(chǔ)油的化學(xué)組成。使用氰基柱和二氧化硅柱雙柱的組合。正己烷用作流動(dòng)相，折射率檢測(cè)器用于檢測(cè)不同的來(lái)源。和蒸餾范圍內(nèi)的基礎(chǔ)油烴的家族組成。

高效液相色譜儀用途

過(guò)去，高效液相色譜儀在石油化學(xué)工業(yè)中，農(nóng)藥、環(huán)保，薄層色譜（TLC）和氣相色譜（OC）常用于含量測(cè)定，而液相色譜（LC）僅用于測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)樣品。并研究分離的可能性。

高效液相色譜在生命科學(xué)研究工作中，最大的問(wèn)題是基因的解密。從基因組DNA序列，基因的表達(dá)時(shí)間無(wú)法回答、表達(dá)量、蛋白質(zhì)、的翻譯后加工和修飾及其亞細(xì)胞分布。這些問(wèn)題在基因組中無(wú)法解決，預(yù)計(jì)會(huì)在Proteome研究中找到答案。在研究的細(xì)胞中有30,000到50,000種具有不同功能的蛋白質(zhì)。目前，蛋白質(zhì)組學(xué)研究中使用的雙向電泳方法只能區(qū)分2000~3000個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。可以通過(guò)使用具有尺寸排阻色譜的二維HPLC高效液相色譜進(jìn)行預(yù)分離來(lái)嘗試現(xiàn)代蛋白質(zhì)組分析。高效液相色譜和雙向電泳將成為蛋白質(zhì)組學(xué)的重要分離工具。因此，高效液相色譜將為揭示生命的奧秘做出更大的貢獻(xiàn)。本內(nèi)容來(lái)源：冉盛網(wǎng)百度貼吧貼子：分析各大品牌高效液相色譜儀哪家好？

高效液相色譜儀的使用和原理分析對(duì)于新手來(lái)說(shuō)有很大的幫助

高效相色譜法是一種分離技術(shù)，試樣混合物的分離過(guò)程也就是試樣中各組分在稱之為色譜分離柱中的兩相間不斷進(jìn)行著的分配過(guò)程。

其中的一相固定不動(dòng)，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過(guò)此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動(dòng)相。

標(biāo)簽：液相色譜儀高效原理