elisa試劑盒的主要設備

試劑

（1） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:

Na2CO3 1.59克

NaHCO3 2.93克

加蒸餾水至1000ml

（2） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M

KH2PO4 0.2克

Na2HPO4?12H2O 2.9克

NaCl 8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05% 0.5ml

加蒸餾水至1000ml

（3） 稀釋液：

牛血清白蛋白（BSA） 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

（4） 終止液（3M H2SO4）：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:

0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml

0.1M檸檬酸（19.2克/L） 24.3ml

加蒸餾水50ml。

（6） TMB（四甲基聯苯胺）使用液:

TMB（10mg/5ml無水乙醇）0.5ml

底物緩沖液（PH5.5） 10ml

0.75%H2O2 32μl

（7） ABTS使用液:

ABTS 0.5mg

底物緩沖液（PH5.5） 1ml

3%H2O2 2μl

（8） 抗原、抗體和酶標記抗體。

（9） 正常人血清和陽性對照血清。

器材

（1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。

（2） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

（3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

試驗原理

試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10． 底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

有誰對ELISA試劑盒了解？？

（一）ELISA測定技術的發展

然而，影響Elisa試驗結果的因素很多，故加強各個環節的質量保證才能充分發揮其方法學的優點。 一、Elisa試劑盒測定技術的發展 臨床測定技術的發展主要在于方法學的發展，而方法學的發展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。目前，分子生物學正在并最終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而徹底的認識，其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。 1、基因工程試劑對免疫測定技術 發展的影響 免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何優質的診斷試劑離不開優質的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各總化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。 HBsAg試劑特點（檢測模式：臨 床抗體夾心法）： 包被抗體為山羊多抗，多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應性。 酶表抗體為與HBsAg有不同結合位點的鼠復合單位。 可測得HBsAg變異樣品。 提高檢測的特異性（99.98%） 提高檢測的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg標準品，對ad標準品的靈敏度為0.05ng/ml對ay標準品靈敏度為0.025ng/ml elisa試劑盒的用途 測試劑盒檢測原理 ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過氧化物酶）酶結合物，經第二次孵育后，酶結合物就會與第一次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒 的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性

[編輯本段]（二） 操作步驟

方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 1. 包被：用0.05MPH9.短妓嵫偉換撼逡航固逑∈橢戀鞍字屎課1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。 2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。 3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。 4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。 5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。 6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 方法二 用于檢測未知抗體的間接法： 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。 ↓ 加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔 中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照） ↓ 于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 ↓ 其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。

[編輯本段]（三） 試劑器材

1. 試劑 （1） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaHCO3 1.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml （2） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4?12H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml （3） 稀釋液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。 （4） 終止液（2M H2SO4）： 蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。 （5） 底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml 加蒸餾水50ml。 （6） TMB（四甲基聯苯胺）使用液: TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5） 10ml 0.75％H2O2 32μl （7） ABTS使用液: ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5） 1ml 3％H2O2 2μl （8） 抗原、抗體和酶標記抗體。 （9） 正常人血清和陽性對照血清。 2. 器材: （1） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。 （2） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。 （3） 4℃冰箱，37℃孵育箱。

我比較了解，我現在就從事這類的工作！QQ：113575866

有機會可以多溝通

你需要那一種的，具體的可以問我，QQ：197009420

你需要什么樣子的 具體些 要是不懂可以問我62827321

標簽：試劑盒了解ELISA