一、與經典的抗原抗體檢測技術相比，免疫標記技術有何優點

免疫標記分析技術主要包括：放射物標記、酶標記、發光標記、熒光標記和金標記方法。 1 放射物標記分析： 用放射物標記抗原或抗體發展的放射免疫分析(radio immunoassay, RIA)是美國科學Yalow 和Berson于1959年創立的一種微量分析法,它是將具有高靈敏度的放射性核素示蹤技術和特異性免疫化學技術相結合而建立的新方法。該技術利用核素標記物的放大效應,改善了待測物的檢測下限,同時以抗體或抗原作為結合試劑,大大提高了檢測方法的特異性。 2 熒光標記分析： 以熒光標記的熒光免疫分析(fluorescein immunoassay, FIA)是由Conn等首創于20世紀40年代的一種標記免疫學技術,其所用標記物是熒光素和熒光染料,是將抗原或抗體標記以熒光物質與相應抗原或抗體結合,在熒光顯微鏡或紫外線照射下,檢測熒光強度和熒光現象的一種檢測方法。熒光標記免疫法靈敏度高,但熒光素常會產生生物學毒性,導致抗體或抗原的靈敏度和選擇性下降 3.酶標記分析技術： 是繼免疫熒光抗體技術和放射免疫分析之后發展起來的一大新型的血清學技術。1966年，Nakane等和Avrameas等分別報道用酶代替熒光素標記抗體，建立了酶標抗體技術(enzyme-labelled antibody technique)，用于生物組織中抗原的定位和鑒定。1971年，Engvall Van Weemen等報道了酶聯免疫吸附試驗，從而建立了酶標抗體的定量檢測技術。20世紀80年代，基于酶標記抗體檢測和鑒定蛋白質分子的免疫轉印技術問世。目前，免疫酶標記技術已成為免疫診斷、檢測和分子生物學研究中應用最廣泛的免疫學方法之一。 4.發光標記分析 20世紀80年代末,國外開始用化學發光試劑來標記抗原或抗體,從而建立了發光免疫分析技術。狹義的發光免疫分析( luminescence immunoassay,LIA )主要是指化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)。另外,還有酶放大化學發光免疫分析和電化學發光免疫分析( electrochemiluminescence immunoassay , ECLIA)。CLIA是Sohrocler和Halman在20世紀70年代末期建立的,該方法兼有發光分析的高靈敏度和免疫反應的特異性。其基本原理同酶標記分析法,是用化學發光反應的試劑(可以是發光劑或催化劑等)標記抗原或抗體, 標記后的抗原和抗體與待測物經過一系列的免疫反應和理化步驟(如離心分離、洗滌等),最后以測定發光強度形式測定。 5 超順磁微粒標記分析 以磁性粒子標記的磁性免疫分析技術(Magnetic Immuno Chromatofraphic Tes,tMICT)是現代物理學與生物技術結合研發生產的磁性分析檢測技術,最早應用于基礎醫學領域[13,14]。與其它標記技術不同,該技術一個顯著的優點就是用磁性粒子標記不受有色雜質干擾,可用于直接測量血液、食品、污水等有色樣品。其原理是利用超順磁性納米微粒作為標記物,由高靈敏度磁性檢測儀器測定結合在免疫復合物上的磁性微粒所產生的局部磁場效應,從而得出所測分析物的定量結果。

二、用于標記的熒光素應具備哪些條件

用于標記的熒光素應符合以下要求：

1.應具有能與蛋白質分子形成共價鍵的化學基團，結合后不易解離，而未結合者易清除；

2.熒光效率高，與蛋白質結合后，仍能保持較高的熒光效率；

3.熒光色澤與背景組織的色澤對比鮮明；

4.與蛋白質結合后不影響蛋白質原有的生化與免疫學性質；

5.標記方法簡單、安全無毒；

三、熒光精華怎么合成？

熒光探針是一種極好的生物分子傳感器,具備高靈敏性、快速反應時間以及通過顯微鏡成像能提供高空間解析度等特點。近年來,大量以熒光素為核心的熒光探針被開發出來。隨著生物技術的不斷發展,基于熒光素的熒光探針已經在蛋白質、核酸、細胞檢測及免疫分析等方面發揮了重要作用。 近來,熒光素分子被認為能理解為一種直接相連的電子給與-接受體系。這兩部分處于分開的共軛體系,因為他們互相垂直,而且他們的熒光性質能通過分子內的光誘導的電子轉移(PeT)從苯環半部分到熒光團接受者(a-PeT)來調節。據文獻報道熒光素衍生物的熒光量子效率取決于苯環半部分的氧化電位和HOMO能級。幾乎現在所有的與熒光團電子接受體相連的電子給與體都是苯環半部分,而極少以芳雜環半部分作為電子給與體。 基于對帶芳雜環的熒光素衍生物的濃厚興趣,我們設計了一種簡單有效的合成方法,首先以芳香胺為起始原料,合成5-甲基-1-芳基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸為原料,經過富克反應與間苯二酚合成10個具有潛在應用價值的(2,4-二羥基苯基)-(5-甲基-1-芳基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-甲酮新型化合物;再在催化劑作用下,在熔融狀態下與間苯二酚縮合得到10個新的具有較高熒光量子效率的9-(5-甲基-1-芳基-1,2,3-三唑-4-基)-6-羥基-3H-呫噸-3-酮。并對其在EtOH和0.1 N NaOH中的熒光性質進行了研究,同時用單晶X光衍射法測定了9-[5-甲基-1-(3-氯苯基)-1,2,3-三唑-4-基]-6-羥基-3H-呫噸-3-酮的晶體結構。

標簽：熒光合成精華