手性色譜柱是由具有光學(xué)活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相。通過引入手性環(huán)境使對映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異，從而達到光學(xué)異構(gòu)體拆分的目的。要實現(xiàn)手性識別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結(jié)果。這些相互作用通過影響包埋復(fù)合物的形成，特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結(jié)果。由于這種作用力較微弱，因此需要仔細調(diào)節(jié)、優(yōu)化流動相和溫度以達到最佳分離效果。常見的手性色譜柱有以下兩種類型：
A、配位交換型：
手性配位交換色譜(ChiralLigandExchangeChromatography，CLEC)由Davankov發(fā)明，是通過形成光學(xué)活性的金屬絡(luò)合物而達到手性分離，屬于IrvingWainer分類中的第4類手性固定相，主要用于分離氨基酸類。
由于此類固定相是由手性氨基酸—銅離子絡(luò)合物鍵合到硅膠或聚合物上形成，因此流動相中必須含有銅離子以保證手性固定相上的銅離子不至流失。其它的過渡金屬元素也已用于手性配位交換色譜，但銅離子應(yīng)用最廣。形成絡(luò)合物的過程十分緩慢，因此有時需提高柱溫，最佳溫度約50℃。
手性配位交換色譜僅對α-氨基酸和其類似物有效。β-氨基酸很難用手性配位交換色譜得以分離。手性配位交換色譜可用于制備，由于流動相中存在銅離子，雖然銅離子能用離子交換柱除去，但增加了樣品處理的困難。
B、大環(huán)抗生素型：
大環(huán)抗生素型手性色譜柱是最近發(fā)展起來的，通過將大環(huán)抗生素鍵合到硅膠上制成的新型手性色譜柱。大環(huán)抗生素型手性色譜柱的出現(xiàn)歸功于DanArmstrong的貢獻。此類色譜柱常用的大環(huán)抗生素主要由三種：利福霉素(Rifamycin)，萬古霉素(Vancomycin)，替考拉寧(Ticoplanin)。利福霉素作為手性添加劑在毛細管電泳分離手性化合物方面得到了成功運用。萬古霉素和替考拉寧分子結(jié)構(gòu)中存在“杯”狀結(jié)構(gòu)區(qū)和糖“平面”結(jié)構(gòu)區(qū)。此類色譜柱性質(zhì)穩(wěn)定，可用于多種分離模式。手性分離基于氫鍵、π-π作用、形成包合物、離子作用和肽鍵等。
替考拉寧分子量為1885，結(jié)構(gòu)中存在20個手性中心，3個糖基和4個環(huán)。酸性基團在多肽杯”/“裂層”的一端，堿性基團在它的另一端。酸性基團和堿性基團提供了離子作用點。糖基在三個平面上，可折疊起來將化合物分子包埋在多肽“杯”中。
萬古霉素分子量為1449，結(jié)構(gòu)中存在18個手性中心，3個環(huán)。萬古霉素具有“籃狀”結(jié)構(gòu)，它的附近還有一個可彎曲的糖平面，可將分析物分子包埋在“籃子”中。羧基和仲氨基分布在“籃子”的邊緣，參與和分析物分子產(chǎn)生離子作用。萬古霉素手性色譜柱可用于反相模式、正相模式和極性模式。萬古霉素手性色譜柱可以分離胺類、中性酰胺、脂類。但對于酸性化合物選擇性較低。在反相模式中，有機相常用四氫呋喃、乙腈和甲醇。水相常用三乙胺-乙酸緩沖液。色譜柱適用的pH范圍為4-7。通常優(yōu)化堿性化合物手性分離條件時，選擇pH=7為起點比較好。另外四氫呋喃、乙腈有最好的選擇性。有時采用純的甲醇和乙醇作流動相也可達到好的分離效果。萬古霉素手性色譜柱也可用正相模式，采用正己烷/乙醇為流動相。

標(biāo)簽：色譜柱場上常見