《單克隆抗體制備及純化》
作者:訪客發(fā)布時(shí)間:2021-07-14分類:催化劑及助劑瀏覽:102
??單抗的用途:
單克隆抗體具有高度特異性、高純度特點(diǎn),使其在很大濃度范圍內(nèi)獲得低背景,所以在組織免疫染色中特別有用,但是大多數(shù)單抗在深固定的組織中不能很好的與抗原反應(yīng)。還可以應(yīng)用于免疫沉淀,免疫印跡技術(shù),雖然都具有特異性高,背景低的有點(diǎn),但都存在很明顯的缺點(diǎn),比如親和力低,可能出現(xiàn)交叉反應(yīng)等等,所以在應(yīng)用時(shí)需要慎重。
??另外單抗還可以用來進(jìn)行免疫親和純化抗原;對(duì)單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記還可以用做快速診斷以及疫苗的研究等等。
一般用來免疫的蛋白都并不一定要具有生物活性,關(guān)鍵是要具有免疫原性也就是抗原性。既變性的蛋白,只要保持抗原性,也可作為抗原用來注射產(chǎn)生抗體,也就可以做單抗。
??一般來說,如果免疫原和抗原純度高比較好,就可以獲得較多的分泌特異性抗體的目的雜交瘤(但實(shí)際很難做到)。
若用于蛋白的細(xì)胞定位等,在篩選和鑒定單抗時(shí)應(yīng)注意,用于篩選鑒定的抗原純度應(yīng)比免疫原純度高。
常規(guī)免疫方案:
一般初次基礎(chǔ)免疫每只小鼠10~100微克抗原加福氏完全佐劑,注射于小鼠的頸背部皮下(多點(diǎn))或腹腔內(nèi),
二次基礎(chǔ)免疫取同量抗原 福氏不完全佐劑注射小鼠的頸背部皮下(多點(diǎn))或腹腔內(nèi),
加強(qiáng)免疫取同量抗原不加佐劑靜脈、腹腔注射或脾內(nèi)注射。
??基礎(chǔ)免疫最好同時(shí)免疫幾只小鼠。
脾內(nèi)免疫方案:時(shí)間短,抗原用量少(2~10微克可溶性抗原)
體外免疫方案:只需要0。5~5微克/ml脾細(xì)胞培養(yǎng)液。
注意:抗原用量少的方案,免疫效果也隨之降低。
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