《單克隆抗體制備及純化》
作者:訪客發布時間:2021-07-14分類:催化劑及助劑瀏覽:116
導讀:??單抗的用途:單克隆抗體具有高度特異性、高純度特點,使其在很大濃度范圍內獲得低背景,所以在組織免疫染色中特別有用,但是大多數單抗在深固定的組織中不能很好的與抗原反應。還可以應用于...
??單抗的用途:
單克隆抗體具有高度特異性、高純度特點,使其在很大濃度范圍內獲得低背景,所以在組織免疫染色中特別有用,但是大多數單抗在深固定的組織中不能很好的與抗原反應。還可以應用于免疫沉淀,免疫印跡技術,雖然都具有特異性高,背景低的有點,但都存在很明顯的缺點,比如親和力低,可能出現交叉反應等等,所以在應用時需要慎重。
??另外單抗還可以用來進行免疫親和純化抗原;對單克隆抗體進行標記還可以用做快速診斷以及疫苗的研究等等。
一般用來免疫的蛋白都并不一定要具有生物活性,關鍵是要具有免疫原性也就是抗原性。既變性的蛋白,只要保持抗原性,也可作為抗原用來注射產生抗體,也就可以做單抗。
??一般來說,如果免疫原和抗原純度高比較好,就可以獲得較多的分泌特異性抗體的目的雜交瘤(但實際很難做到)。
若用于蛋白的細胞定位等,在篩選和鑒定單抗時應注意,用于篩選鑒定的抗原純度應比免疫原純度高。
常規免疫方案:
一般初次基礎免疫每只小鼠10~100微克抗原加福氏完全佐劑,注射于小鼠的頸背部皮下(多點)或腹腔內,
二次基礎免疫取同量抗原 福氏不完全佐劑注射小鼠的頸背部皮下(多點)或腹腔內,
加強免疫取同量抗原不加佐劑靜脈、腹腔注射或脾內注射。
??基礎免疫最好同時免疫幾只小鼠。
脾內免疫方案:時間短,抗原用量少(2~10微克可溶性抗原)
體外免疫方案:只需要0。5~5微克/ml脾細胞培養液。
注意:抗原用量少的方案,免疫效果也隨之降低。
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